做ELISA实验，有几种常见的实验方法，他们分别是竞争法、捕获法、间接法、夹心法、而夹心法又可以分为双抗体夹心法和双抗原夹心法！在今天的文章中，将详细得跟大家讲述双抗体夹心法！
双抗体夹心法，其基本原理是将一定量的包被抗体以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入无关蛋白载体封闭未结合位点，然后加入待检标本，通过加入检测抗体，酶标记第二抗体后用TMB底物显色，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈正相关。
该方法的适用条件是：含有多个抗原表位的大分子物质。因为这种检测方法需要两种抗体，所以就涉及抗体配对的问题。一般而言，常用的抗体配对方法有一下几种：包被抗体为单抗，检测抗体为多抗；包被抗体为单抗，检测抗体为单抗，但这两种单抗针对的抗原表位不同；包被抗体为多抗，检测抗体为多抗，这两种多抗一般是来源于不同的宿主。
这种检测方法在应用酶标第二抗体时，应该注意的一个原则是：第二抗体必须只能针对检测抗体，而不能针对包被抗体。鉴于酶标二抗的局限性，现在一般厂家都引入生物素亲和素放大系统，这种系统在提高反应灵敏度的同时，应用起来也更加方便，我们只需要对检测抗体进行生物素标记，不需要对每一种不同来源的二抗进行酶标记，只需对亲和素做HRP标记就可以省去很多繁琐的工作。
