ELISA实验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。选择试剂时，应选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
ELISA加样步骤的常见问题：
①：过长(特别是室内温度较高时)；
②：手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间；
③：加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。.血清或血浆标本分离不好即进行加样。
对应解决方法：
①：标本为血清，最好将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。
②：加样后及时放入孵箱。
③：加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
④：如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
⑤：标本较多时，请分批操作。
ELISA试剂盒在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
