五味子水提物对反复脑缺血再灌注小鼠学习记忆及脑能量代谢的影响
马素好李凤丽张家梁( 郑州澍青医学高等专科学校，河南郑州450064)
〔摘 要〕 目的 探讨五味子水提物对反复脑缺血再灌注小鼠学习记忆及脑能量代谢的影响。方法 将小鼠随机分为空白组、模型组、尼莫地平组、五味子水堤物大、中、小剂量组，后四组分别灌服尼莫地平混悬液、五味子水提物大、中、小剂量。空白组和模型组给予同体积生理盐水，每日 1 次，连续给药 10 d，采用双侧颈总动脉夹闭，建立反复脑缺血再灌注模型。术后24 h 用避暗法进行行为学检测，观察并记录小鼠首次进入暗室的潜伏期及 5 min 内进入暗室遭电击的次数。行为学检测完毕小鼠断头取脑，测乳酸( LD) 、乳酸脱氢酶( LDH) 、乙酰胆碱酯酶( AchE) 活力以及 ATP 酶活力。结果 与模型组相比，尼莫地平组可以显著增加小鼠的潜伏期、显著降低小鼠错误反应发生的次数( 均 P ＜ 0. 01) ，五味子水提物大剂量组可以明显增加小鼠潜伏期并显著降低小鼠错误反应发生的次数( P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) 。与模型组相比，尼莫地平组、五味子水提物中、小剂量组均可显著减少小鼠 LD 的含量( P ＜ 0. 01) ，尼莫地平组、五味子水提物大、中剂量组均可以显著升高小鼠 LDH 的活力( P ＜ 0. 01) ，尼莫地平组、五味子水提物组小剂量均可显著升高小鼠 AchE 活力( P ＜ 0. 01) ; 与模型组相比，尼莫地平组、五味子水提物大剂量组可以显著升高小鼠 Na + -K + -ATP 酶活力( P ＜
0. 01) ，尼莫地平组、五味子水提物大、中剂量组均能显著升高小鼠 Ca2 + -ATP 酶活力( P ＜ 0. 01) ，尼莫地平组、五味子水提物大剂量组能够显著升高小鼠 Ca2 + -Mg2 + -ATP 酶活力( P ＜ 0. 01) 。结论 五味子水提物可以改善小鼠的学习记忆能力并提高脑组织功能。
〔关键词〕 五味子水提物; 反复脑缺血再灌注; 学习记忆; 脑能量代谢
〔中图分类号〕 Ｒ285 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202( 2016) 21-5243-02; doi: 10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2016. 21. 012
对于脑血管疾病的治疗，目前西医仅以改善脑部血循环、 扩血管增加缺血区血流量、消除脑水肿、降低血液黏滞性、防止血栓延续等对症治疗为主〔1〕，但大多西药都伴随着严重不良反应，制约了药物疗效的发挥和疾病的康复。中药在对抗脑缺血发作方面有着自己的优势。五味子性酸、甘、温，具有收敛、固涩、益气生津、补肾宁心之功效。前期人们重在对五味子的药理药性方面的研究。近年来，有人对五味子药理活性也进行了研究〔2〕，本实验研究五味子水提物对反复脑缺血再灌注致记忆障碍小鼠学习记忆以及能量代谢的影响。
1 材料与方法
1. 1 实验动物昆明种小鼠，体重 19 ～ 22 g，雌雄各半，由河北医科大学动物中心提供，合格证号: 1011023。
1. 2 试剂 五味子为木兰科植物五味子( Turcz) 的干燥成熟果实，又称北五味子〔3〕，该药购自河南皖西制药有限公司，并经专家鉴定为正品。五味子 100 g，经水煎煮两次，合并两次滤液，浓缩至 200 ml( 1 ml 含生药 0. 5 g) 。尼莫地平片，生产厂家: 天津市中央药业有限公司，规格 30 mg / 片，批号 0903108。小鼠条件反射箱，淮北正华生物仪器设备有限公司。乙酰胆碱酯酶( AChE) 测试盒，上海恒远生物科技有 限公司，批 号20111012; 乳酸脱氢酶( LDH) 测试盒，上海恒远生物科技有限公司，批号 20110911; 乳酸( LD) 测试盒，上海恒远生物科技有限公司，批号 20111009; ATP 酶测试盒，上海恒远生物科技有限公司，批号 20111101。
1. 3 实验方法 将 72 只昆明种小鼠随机分成 6 组( 雌雄分笼饲养) ，分别为: 空白组、模型组、尼莫地平组、五味子水提物大、中、小剂量组。除空白组和模型组外，给尼莫地平组小鼠灌服
基金项目: 郑州市科技创新团队资助项目( No. 121PCXTD520)
第一作者: 马素好( 1969-) ，女，在职硕士，主治医师，主要从事心脑血管内科研究。
尼莫地平混悬液( 0. 01 g / kg、0. 2 ml /10 g) ，给五味子各组分别灌服五味 子 水 提 物 大、中、小 剂 量 ( 0. 6 g / kg、0. 3 g / kg、
0. 15 g / kg、0. 2 ml /10 g) 。空白组和模型组给予同体积生理盐水，每日 1 次，连续给药 10 d，进行手术。用 10% 的水合氯醛进行麻醉，将上述小鼠仰位固定在鼠板上，行颈部切口，分离双侧颈总动脉，穿线备用。然后用动脉夹夹闭双侧颈总动脉阻断血流，10 min之后，松开动脉夹，使血液再灌注 10 min，反复进行 2次。手术之后的创口应以碘伏消毒，最后缝合伤口。术后24 h，上述各组小鼠均进行行为学测定( 避暗法)〔4〕，将小鼠头部背向洞口放入明室，然后通以 25 V 的电压，同时启动计时器，小鼠一进入立即受到电击，而计时器则同时停止计时。取出小鼠，记录每鼠从放入明室至进入暗室遇到电击所需的时间，此即潜伏期。24 h 后重新测验，记录潜伏期和 5 min 内的电击次数。将完成行为学测定的小鼠断头取脑，其中一半称重， 加 9 倍的生理盐水制成 10% 的脑匀浆，以备测 LD、LDH、AchE 活力以及 ATP 酶活力，上述测定方法均按各自的试剂盒说明书进行。
1. 4 统计学方法 采用 SPSS19. 0 软件进行单因素方差分析。
2 结 果
2. 1 五味子水提物对小鼠行为学的影响( 避暗法) 与空白组相比，模型组可显著降低小鼠的潜伏期、显著升高小鼠的错误 反应次数( 均 P ＜ 0. 01) ，说明该实验造模成功。与模型组相比，尼莫地平组可以显著增加小鼠的潜伏期、显著降低小鼠错 误反应发生的次数( 均 P ＜ 0. 01) ，五味子水提物大剂量组可以明显增加小鼠潜伏期，显著降低小鼠错误反应发生的次数( P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) 。见表 1。
2. 2 五味子水提物对小鼠脑组织中 LD、LDH 及 AChE 活力的影响 与空白组相比，模型组能够显著提高小鼠 LD 的含量、显著减少小鼠 LDH 及 AchE 的活力( P ＜ 0. 01) ，说明本实验造模成功。与模型组相比，尼莫地平组、五味子水提物中、小剂量组
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