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Western Blot实验技术服务
一、概述
蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。Western Blot是利用抗原抗体的免疫反应，先将蛋白通过SDS-PAGE凝胶电泳分离开，再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体上，然后再加上抗体形成抗原抗体复合物，再利用发光或显色的原理将结果显示到膜或者底片上。
SDS-PAGE电泳的高分辨率以及固相免疫测定的特异性和敏感性保证了终实验结果的准确性。WB是半定量实验，相比较于定性实验有数据分析，但是需要严格的参照标准，因此不是准确的数量关系，这也是与定量试验的不同之处。
二、技术流程;
蛋白提取-制胶-电泳-转膜-封闭-一抗孵育-二抗孵育-化学发光-结果分析;
1.根据目标蛋白在细胞中的位置（细胞核中，细胞浆中，细胞膜上）和目标蛋白的性质（变性以及非变性）选择合适的提取蛋白的方法
2.用合适的方法例如Bradford或者BCA法测定蛋白含量
3.根据目标蛋白的大小制作合适浓度的SDS凝胶
4.根据目标蛋白的大小选择合适的电泳电压以及电泳时间
5.根据目标蛋白的大小以及剪切的凝胶的大小选择合适的转膜电流以及转膜时间
6.根据目标蛋白的性质选择合适的封闭方法，例如脱脂奶粉，BSA等方法封闭
7选择合适浓度的一抗进行孵育，洗膜
8选择合适浓度的二抗进行孵育，洗膜
9 ECL发光液进行曝光
三、客户须知
1 检测样本：新鲜的组织或者细胞
2 样本量：检测细胞样本的一个指标的低细胞含量是1*106，检测组织样本的一个指标的低组织样品为30mg（建议多提供样本，便于研磨）
3 样本保存：
（1）新鲜的组织样本：迅速冻存。
（2）悬浮细胞：收集完以后，冷的PBS洗3遍，吸净残余的液体，冷冻保存。
（3）贴壁细胞：吸净培养基以后，预热的PBS洗3遍，胰酶收集，再用冷的PBS洗3遍，吸净残余液体，冷冻保存；对于不适合用胰酶收集的细胞（例如胰酶处理会消化掉一部分蛋白或者对于目标蛋白有刺激作用），预热的PBS洗3遍以后，用细胞刮收集细胞，吸净残余的液体，冷冻保存。
4、请提前告诉我们：您样本的种属（人、大鼠、小鼠、兔、猪等）、样本数量、待测指标。
5、样本邮寄：放入冰袋或者干冰及时寄送，建议选择顺丰快递陆运或者中通快递陆运。
四、报告内容及标准
1 目的蛋白曝光照片一张
2 电子版目的蛋白和内参的照片
3 灰度分析数据一份
4 蛋白含量数据
5 完整的实验报告（试验方法，试验参数，实验仪器参数）
