甲型流感病毒抗体（Flu A-Ab）ELISA试剂盒-恒远生物商城-生化试剂、实验耗材一站式采购平台

甲型流感病毒抗体（Flu A-Ab）ELISA试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

规格：96T

使用目的：

本试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中甲型流感病毒抗体（Flu A-Ab）表达。

实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中甲型流感病毒抗体（Flu A-Ab）表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中甲型流感病毒抗体（Flu A-Ab）相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与 HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中甲型流感病毒抗体（Flu A-Ab）的存在与否。

试剂盒组成

1	30 倍浓缩洗涤液	20ml×1 瓶	7	终止液	6ml×1 瓶
2	酶标试剂	6ml×1 瓶	8	阳性对照	0.5ml×1 瓶
3	酶标包被板	12 孔×8 条	9	阴性对照	0.5ml×1 瓶
4	样品稀释液	6ml×1 瓶	10	说明书	1 份
5	显色剂 A 液	6ml×1 瓶	11	封板膜	2 张
6	显色剂 B 液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1 个

标本要求

1. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2. 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1

孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10分钟.

10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

计算和结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20 临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为甲型流感病毒抗体（Flu A-Ab）阴性阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为甲型流感病毒抗体（Flu A-Ab）阳性。

注意事项

1. 操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物请避光保存。

6. 试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

7. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。

保存条件及有效期

1. 试剂盒保存：；2-8℃。

2. 有效期：6 个月

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